BIO K 146/2 Multiscreen AbELISA Bovine respiratory / indirect, double wells

Для проведения теста используется 96-луночный микропланшет, сенсибилизированный моноклональными антителами, специфичными к трем перечисленным выше патогенам. С помощью этих антител патогены фиксируются на поверхности микропланшета. Патогены распределяются на микропланшете следующим образом:
Ряд 1, 5 и 9: BRSV
Ряд 2, 6 и 10: BPI3
Ряд 3, 7 и 11: Adenovirus 3
Ряд 4, 8 и 12: отрицательный контроль антигенов для вирусов
Ряды 4, 8 и 12 содержат лизат клеточной линии бычьей почки, которая использовалась в качестве субстрата для размножения вирусов. Таким образом, мы имеем настоящий отрицательный контроль, позволяющий отличить специфические для вирусов антитела от антител, направленных против антигенных детерминант клеток почек, использованных для репликации вирусов. Использование такого контроля значительно снижает количество ложноположительных результатов. Исследуемая сыворотка и плазма разводятся 1:100 в соответствующем буфере и инкубируются в планшете в течение одного часа при 21°C +/- 3°C. Планшет промывается, и в лунки добавляется конъюгат - меченное пероксидазой антибычье моноклональное антитело IgG1. Планшет повторно инкубируется при 21°C +/- 3°C в течение 1 часа.
После второй инкубации и промывки препарата добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Преимущество этого хромогена в том, что он более чувствителен, чем другие пероксидазные хромогены, и не является канцерогенным. Если в исследуемых сыворотках присутствуют специфические иммуноглобулины, конъюгат остается связанным с соответствующей микролункой, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность возникающего синего цвета пропорциональна титру специфического антитела в образце. Значения, зарегистрированные для лунок с отрицательным контролем, вычитаются из соответствующих лунок с положительным контролем. Можно количественно оценить реактивность неизвестной сыворотки по шкале от 0 до +++++.