BIO K 267/2 Тест-система МОНОСКРИН для антигенной диагностики Clostridium perfringens beta toxin в супернатантных культурах и биологических жидкостях сэндвич методом ИФА всех видов животных

BoHV-4 (бычий герпесвирус-4) считается вероятным возбудителем крупного рогатого скота. Этот вирус был выделен от животных с различными клиническими признаками. Нередко оно связано с патологиями, затрагивающими половые пути (орхитом или метритом). Он также был выделен от крупного рогатого скота, страдающего расстройствами глаз, дыхания или пищеварения или даже поражениями кожи. Его присутствие было также продемонстрировано у животных, внешне здоровых.
Диагностировать инфекцию, вызванную BoHV-4, можно путем выделения вируса на чувствительной клеточной линии. Рост вируса в этой клеточной линии можно продемонстрировать с помощью специфического антитела, связанного с флурохромом.Энтеротоксемия — смертельное кишечное заболевание, поражающее все виды домашних животных и вызываемое токсигенным типом Clostridium perfringens. Последняя представляет собой анаэробную, сильно грамположительную бактерию, обладающую способностью образовывать термостойкие эндоспоры. Эта бактерия сгруппирована в пять типов (типы A, B, C, D и E) в соответствии с четырьмя основными летальными токсинами: Альфа, Бета, Эпсилон и Йота.
Было показано, что Clostridium perfringens является причиной таких заболеваний человека, как газовая гангрена (клостридиальный мионекроз), пищевое отравление, некротизирующий энтероколит младенцев и некротический энтерит (свиной энтерит). Он также является возбудителем дизентерии ягнят, энтеротоксемии (пораженной) овец и мясистых почек овец, а также других энтеротоксемических заболеваний ягнят и телят. В кишечной жидкости больных или мертвых животных обычно можно обнаружить большое количество токсина в дополнение к большому количеству клеток Clostridium perfringens.
Поскольку Clostridium perfringens является естественным комменсалом кишечника человека и животных, идентификации бактерии недостаточно. Токсинотипирование и количественная оценка выделенных штаммов имеют важное значение.
Набор работает как с культуральными супернатантами, так и с биологическими зондами, такими как жидкое содержимое кишечника и перикардиальная или перитонеальная жидкость.

ПРИНЦИП РАБОТЫ ТЕСТА
В тесте используются 96-луночные микротитровальные планшеты, сенсибилизированные специфическими моноклональными антителами к бета-токсину. Эти антитела позволяют специфически захватывать соответствующий антиген, присутствующий в образцах. Ряды A, C, E, G были сенсибилизированы этими антителами, а ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфическую иммунологическую реакцию и неспецифическое связывание.
Биологические образцы (например: содержимое тонкого кишечника, перитонеальная жидкость...) разводят в буфере для разведения и инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при температуре 21°С +/- 3°С. Культуральные супернатанты используют без разбавления.
    
После этого первого этапа инкубации планшет промывают и инкубируют в течение 1 часа с конъюгатом - меченным пероксидазой специфичным моноклональным антителом против бета-токсина. После второй инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Преимущество этого хромогена состоит в том, что он более чувствителен, чем другие хромогены пероксидазы, и не является канцерогенным.
Если в тестируемых образцах присутствует бета-токсин, конъюгат остается связанным с соответствующими микролунками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность полученного синего цвета пропорциональна титру бета-токсина в образце. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением, а полученную оптическую плотность при 450 нм можно зарегистрировать с помощью фотометра. Сигналы, записанные для микролунок отрицательного контроля, вычитаются из соответствующих микролунок положительного контроля.