BIO K 336/1 Monoscreen AgELISA BRSV / sandwich, double wells

В Европе BRSV является наиболее важным этиологическим агентом, ответственным за респираторные заболевания у молодняка крупного рогатого скота. У крупного рогатого скота, как и у детей, респираторно-синцитиальные вирусы могут глубоко атаковать респираторное де-рева. Заболевание часто провоцируют очень тяжелые травмы. В Европе ежегодно 7 миллионов телят заболевают инфекционными заболеваниями, 60% из которых вызваны респираторными возбудителями. Ежегодно в Европе от респираторных заболеваний умирает 1 миллион телят. Потери от этих заболеваний, включая лечение, задержку роста и смертность, составляет около 450 миллионов евро в год для телят до года. Для ферм, которые разводят молочный скот, потери от BRSV оцениваются примерно в 25 евро на животное.
BRSV в основном поражает молодняк крупного рогатого скота. Мясной скот особенно уязвим из-за высокой доли мышечной массы по сравнению с объемом легких. При заболевании респираторными заболеваниями присутствуют признаки тяжелой пневмонии, такие как полипноэ, брюшное дыхание и гипертермия. Могут наблюдаться реинфекции, но их чаще относят к суб-клиническими признакам. Клиническая диагностика очень сложна, и для постановки точного ди-агноза требуется лабораторная анализ. Вирус можно обнаружить в легочной ткани с помощью меченных флуоресцеином специфических антител.
Диагноз также может быть поставлен путем измерения вирусспецифической сероконвер-сии. Для этого первый образец будет взят во время острой фазы заболевания, а второй образец будет собран через 2 или 3 недели после отбора первого.
Эти два образца будут оцениваться на содержание в них специфических антител против BRSV методом ИФА.
Набор BRSV также можно использовать для постановки диагноза по образцу измельчен-ной легочной ткани, взятому у мертвого животного.

ПРИНЦИП РАБОТЫ ТЕСТА

В тесте используются 96-луночные планшеты для микротитрования, сенсибилизирован-ные специфическими антителами к BRSV. Эти антитела позволяют специфически захватывать соответствующие патогены, присутствующие в образцах (измельченной легочной ткани или культуральной среде). Ряды A, C, E, G сенсибилизированы этими антителами, а ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфиче-ские иммунологические реакции и неспецифическое связывание, чтобы исключить ложнополо-жительные результаты.
Образцы разводят лизисным раствором и инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при 21°С +/- 3°С.
После первой стадии инкубации планшет промывают и инкубируют в течение 1 часа с конъюгатом, меченым пероксидазой моноклональным антителом против BRSV. После второй инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Этот хромо-ген имеет преимущество: он более чувствителен, чем другие хромогены пероксидазы, и не явля-ется канцерогенным.
Если в образце присутствует BRSV, конъюгат остается связанным с соответствующими микролунками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментирован-ное соединение. Интенсивность полученного синего окрашивания пропорциональна титру BRSV в образце. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением и измерить оптическую плотность полученных растворов при 450 нм с помощью фотометра. Значения, полученные для микролунок отрицательного контроля, вычитают из соответствующих микролунок положитель-ного контроля. Положительный контроль предоставляется вместе с набором для подтверждения результатов теста.