BIO K 341/2 Monoscreen AgELISA Mycoplasma bovis/ sandwich, double wells

Mycoplasma bovis связана со многими заболеваниями крупного рогатого скота, включая артрит, пневмонию у телят и молодняка, мастит и половые инфекции. Инфекционные пневмонии, поражающие телят, выращиваемых в условиях интенсивного выращивания, несут значительные экономические потери из-за смертности, затрат на лечение и задержек роста, которые они вызывают. Эти респираторные инфекции часто включают в себя множество факторов и вызываются взаимодействием вирусов, микоплазм и бактерий. Из дыхательных путей телят выделено несколько видов микоплазм. Некоторые из них, скорее всего, являются простыми комменсалами или условно-патогенными видами, которые лишь усугубляют повреждение легких, вызванное другими агентами. Mycoplasma bovis выделена из легких телят, больных пневмонией. Вероятно, это самый патогенный вид, поражающий домашний скот, после Mycoplasma mycoides mycoides. Mycoplasma bovis может индуцировать развитие пневмонии у телят-гнотобиотов. Mycoplasma bovis часто встречается в сочетании с Mannheimia haemolytica при пневмонии у телят.

ПРИНЦИП РАБОТЫ ТЕСТА

Поскольку Mycoplasma bovis обычно присутствует в больных экземплярах в очень небольших количествах, ее необходимо обогатить соответствующей средой (средой Хейфлика, в которую были добавлены антибиотики и антимикотики). После трехдневного выращивания при температуре 37°C непосредственно на микропланшетах набора культуры проверяют на наличие Mycoplasma bovis.
Ряды A, C, E и G на 96-луночных микропланшетах были сенсибилизированы поликлональным антителом, специфичным к Mycoplasma bovis. Это антитело захватывает микоплазму по мере ее роста в культуральной среде. Этот метод иммунообогащения значительно повышает чувствительность теста. Остальные ряды этих микропланшетов (ряды B, D, F и H) были сенсибилизированы поликлональным антителом, неспецифичным к Mycoplasma bovis. Это дает нам настоящий отрицательный контроль, позволяющий определить, произошла ли специфическая реакция связывания. Использование такого контроля значительно снижает количество ложноположительных образцов.
После трехдневного культивирования препарат промывают и добавляют конъюгат, который представляет собой специфическое моноклональное антитело против Mycoplasma bovis, связанное с пероксидазой. После часовой инкубации при 21°C +/- 3°C и второй стадии промывки добавляют хромоген (TMB). Преимущество этого хромогена состоит в том, что он более чувствителен к пероксидазе, чем другие хромогены, и не является канцерогенным. Если в культуре присутствует Mycoplasma bovis, конъюгат остается фиксированным в лунке, содержащей антиген микоплазмы, и фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в соединение синего цвета. Интенсивность синего окрашивания пропорциональна титру Mycoplasma bovis в образце. Сигнал, записанный для отрицательной лунки, сенсибилизированной контрольным поликлональным антителом, вычитают из сигнала, считанного для положительной лунки, сенсибилизированной специфичным к Mycoplasma bovis поликлональным антителом. В комплект поставки входит контрольный антиген для проверки результатов. Этот контрольный антиген состоит из лиофилизированной инактивированной культуры Mycoplasma bovis.