BIO K 343/2 Monoscreen AgELISA Bovine rotavirus / sandwich, double wells

Диарея является основной причиной смертности молодняка крупного рогатого скота в возрасте до одного месяца.
Гастроэнтерит новорожденных крупного рогатого скота является многофакторным заболеванием. Он может быть вызван вирусами: коронавирусом или ротавирусом, бактериями: Salmonella или E.coli F5 (K 99) или простейшими микроорганизмами, такими как Cryptosporidium.
Коронавирус и ротавирус часто связаны с эпизодами диареи новорожденных.
Диагностировать этиологический агент диареи можно только в лабораторных условиях, так как клинические признаки не позволяют дифференцировать эти разные микроорганизмы. Эти агенты можно идентифицировать с помощью различных методов, включая посев, окрашивание, электронную микроскопию и флотационные методы. Однако эти методы трудоемки, непрактичны и требуют много времени.
Эти классические методы были быстро заменены технологией ИФА из-за ее простоты и ограниченных требований к лабораторному оборудованию.
Чувствительность и специфичность метода ИФА для обнаружения этих патогенов, по крайней мере, не уступают более классическим методам; результаты очень похожи. Метод ИФА является быстрым и надежным и особенно подходит для анализа большого количества образцов.

ПРИНЦИП РАБОТЫ ТЕСТА

В тесте используются 96-луночные планшеты для микротитрования, сенсибилизированные специфическими антителами к ротавирусу. Эти антитела позволяют специфически захватывать соответствующие патогены, присутствующие в образцах фекалий. Ряды A, C, E, G были сенсибилизированы этими антителами, а ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфическую иммунологическую реакцию и неспецифическое связывание, чтобы исключить ложноположительные результаты.
Фекалии разводят в буфере для разведения и инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при 21±3°С.
После первой стадии инкубации планшет промывают и инкубируют в течение 1 часа с конъюгатом, меченым пероксидазой специфичным моноклональным антителом против ротавируса. После второй инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Преимущество этого хромогена заключается в том, что он более чувствителен, чем другие хромогены пероксидазы, и не является канцерогенным.
Если ротавирус присутствует в тестируемых фекалиях, конъюгат остается связанным с соответствующими микроячейками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность полученного синего цвета пропорциональна титру ротавируса в образце. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением, а результирующую оптическую плотность при 450 нм можно зарегистрировать с помощью фотометра. Сигналы, записанные для микролунок отрицательного контроля, вычитают из соответствующих микролунок положительного контроля. Положительный контроль предоставляется вместе с набором для подтверждения результатов теста.