BIO K 344/2 Monoscreen AgELISA Bovine coronavirus / sandwich, double wells

Диарея является основной причиной смертности молодняка крупного рогатого скота в возрасте до одного месяца.
Гастроэнтерит новорожденных крупного рогатого скота является многофакторным забо-леванием. Это может быть вызвано вирусами: коронавирусом или ротавирусом; бактериями: Salmonella или E.coli F5 или простейшими микроорганизмами, такими как Cryptosporidium.
Коронавирус и ротавирус часто связаны с эпизодами диареи новорожденных.
Диагностика этиологического агента диареи может быть проведена только в лаборатор-ных условиях, так как клинические признаки не позволяют дифференцировать эти микроорганиз-мы. Эти заболевания можно идентифицировать с помощью различных методов, включая посев, окрашивание, электронную микроскопию и флотационные методы. Однако эти методы трудоем-ки, непрактичны и требуют много времени.
Эти классические методы были быстро заменены технологией ИФА из-за ее простоты и ограниченных требований к лабораторному оборудованию.
Чувствительность и специфичность метода ИФА для обнаружения этих патогенов, по крайней мере, не уступают более классическим методам; результаты очень похожи. Метод ИФА является быстрым и надежным и особенно подходит для анализа большого количества образцов.

ПРИНЦИП РАБОТЫ ТЕСТА

В тесте используются 96-луночные планшеты для микротитрования, сенсибилизирован-ные специфическими антителами к коронавирусу. Эти антитела позволяют специфически захва-тывать соответствующие патогены, присутствующие в образцах (измельченной легочной ткани, лизатах тканей верхних дыхательных путей или культуральной среде). Ряды A, C, E, G были сен-сибилизированы этими антителами, а ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфические иммунологические реакции и неспеци-фическое связывание, чтобы исключить ложноположительные результаты.
Образцы разводят лизисным раствором и инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при 21°С±3°С.
После этой первой стадии инкубации планшет промывают и инкубируют в течение 1 часа с конъюгатом, меченым пероксидазой моноклональным антителом против коронавируса. После этой второй инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Этот хромоген имеет преимущество: он более чувствителен, чем другие хромогены пероксида-зы, и не является канцерогенным.
Если в образце присутствует коронавирус, конъюгат остается связанным с соответству-ющими микролунками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигмен-тированное соединение. Интенсивность полученного синего окрашивания пропорциональна тит-ру коронавируса в образце. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением. Резуль-тат получают, считывая оптическую плотность при 450 нм с помощью фотометра. Сигналы, за-писанные для микролунок отрицательного контроля, вычитают из соответствующих микролунок положительного контроля. Положительный контроль предоставляется вместе с набором для подтверждения результатов теста.