BIO K 347/2 Multiscreen AgELISA Calf digestive / sandwich, double wells

Диарея является одной из основных причин смертности молодняка крупного рогатого скота в возрасте до одного месяца.
Гастроэнтерит новорожденных телят крупного рогатого скота является многофакторным заболеванием. Это может быть вызвано вирусами: ротавирусом или коронавирусом; бактериями: сальмонеллой или кишечной палочкой F5; или простейшими микроорганизмами, такими как Cryptosporidium.
Диагностировать этиологический агент диареи можно только в лаборатории, так как клинические признаки не позволяют дифференцировать разные микроорганизмы. Эти агенты можно идентифицировать с помощью различных методов культивирования и флотации, включая окрашивание. Однако эти методы трудоемки и непрактичны.
Эти классические методы были заменены технологией ИФА из-за простоты выполнения анализа.
Чувствительность и специфичность метода ИФА для обнаружения этих патогенов, сравнимы с характеристиками классических методов, результаты анализов очень похожи. Метод ИФА является быстрым и надежным и особенно подходит для анализа большого количества образцов.

ПРИНЦИП РАБОТЫ

В тесте используются 96-луночные микротитровальные планшеты, сенсибилизированные специфическими антителами к коронавирусу и ротавирусу. Эти антитела позволяют специфически захватывать соответствующие патогены, присутствующие в образцах фекалий. Ряды A, C, E и G были сенсибилизированы этими антителами, а ряды B, D, F и H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфическую иммунологическую реакцию и неспецифическое связывание.
Фекалии разводят буфером для разведения и инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при 21°С +/- 3°С.
После первой стадии инкубации планшет промывают и инкубируют в течение 1 часа с конъюгатами, меченым пероксидазой моноклональным антителом, специфичным к ротавирусу, и меченым пероксидазой моноклональным антителом, специфичным к коронавирусу. После второй инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Этот хромоген имеет преимущество: он более чувствителен, чем другие хромогены пероксидазы, и не является канцерогенным.
Если в тестируемых фекалиях присутствует коронавирус или ротавирус, конъюгаты остаются связанными с соответствующими микролунками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность полученного синего цвета пропорциональна титру коронавируса или ротавируса в образце. Комбинированное заражение как коронавирусом, так и ротавирусом также может быть выявлено. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением, а результирующую оптическую плотность при 450 нм можно зарегистрировать с помощью фотометра. Сигналы, записанные для микролунок отрицательного контроля, вычитают из соответствующих микролунок положительного контроля. Положительный контроль предоставляется вместе с набором для подтверждения результатов теста.