BIO K 348/5 Multiscreen AgELISA Calf digestive / sandwich, double wells

Диарея является основной причиной смертности молодняка крупного рогатого скота в возрасте до одного месяца. Неонатальный гастроэнтерит крупного рогатого скота – это многофакторное заболевание. Он может быть вызван вирусами (коронавирус или ротавирус), бактериями: (Salmonella, патогенные штаммы E. coli) или простейшими, такими как Cryptosporidium.
Коронавирус и ротавирус часто связаны с эпизодами неонатальной диареи. Cryptosporidium также часто выделяют из кала, где он может присутствовать в очень больших количествах. F5-положительная энтеротоксигенная кишечная палочка часто выделяется у телят в возрасте до трех дней, особенно у телят, лишенных колострума, или у телят, которых кормили колострумом, не содержащим специфических антител против E. coli F5 +.
Диагностика этиологического агента диареи может быть проведена только в лаборатории, поскольку клинических признаков недостаточно, чтобы отличить эти разновидности микроорганизмов. Идентифицировать этих возбудителей можно с помощью различных методов, включая посевы, окрашивание, электронную микроскопию и методы флотации. Однако эти методы трудоемки, непрактичны и отнимают много времени.
На смену этим классическим методам пришла технология ИФА из-за ее простоты и минимальных требований к лабораторному оборудованию.
Чувствительность и специфичность метода ИФА для выявления этих патогенов, по крайней мере, не хуже, чем у традиционного метода, а результаты очень похожи. Метод ИФА является быстрым и надежным и особенно подходит для анализа большого количества образцов.

ПРИНЦИП ПРОВЕДЕНИЯ ТЕСТА

На чередующихся рядах 8×12-луночных микротитровальных планшетов были иммобилизованы специфические антитела против патогенов, вызывающих заболевания органов пищеварения. Эти антитела позволяют специфически захватывать соответствующие патогены в образцах фекалий. Ряды A, C, E, G были сенсибилизированы этими антителами, а ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти ряды позволяют дифференцировать специфические иммунологические реакции от неспецифического связывания, чтобы исключить ложноположительные результаты.
Образцы кала разводятся в буфере для разведения и инкубируются на микропланшете в течение 1 часа при температуре 21°C +/- 3°C.
После первого этапа инкубации планшет промывают, а затем в лунки добавляют конъюгаты – меченные пероксидазой антипатогенные моноклональные антитела. Затем планшет инкубируется в течение 1 часа при 21°C +/- 3°C.
После второго этапа инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Преимущество этого хромогена в том, что он более чувствителен, чем другие пероксидазные хромогены, и не является канцерогенным.
Если в исследуемом кале присутствуют специфические патогены, конъюгаты остаются связанными с соответствующими микроячейками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность полученного синего цвета пропорциональна титру конкретных патогенов в образце. Ферментную реакцию останавливают подкислением, а оптическую плотность измеряют на фотометре при длине волны 450 нм. Значения оптической плотности микролунок с отрицательным контролем вычитаются из значений оптической плотности соответствующих положительных микролунок.
Положительный контроль поставляется в комплекте для подтверждения результатов теста.