BIO K 382/2 Multiscreen AbELISA Alpha toxin and C.perf

Энтеротоксемия — фатальное кишечное заболевание, поражающее все виды домашних животных и вызываемое токсигенным типом Clostridium perfringens. Последний представляет собой анаэробную сильно грамположительную бактерию, обладающую способностью образовывать термостойкие эндоспоры. Эта бактерия сгруппирована в пять типов (типы A, B, C, D и E) в соответствии с четырьмя основными смертельными токсинами: альфа, бета, эпсилон и йота (α, β, ε, ι). Было показано, что C. perfringens является причиной таких заболеваний человека, как газовая гангрена (клостридиальный мионекроз), пищевое отравление, некротизирующий энтероколит младенцев и некротический энтерит (пигбел). Он также является возбудителем дизентерии ягнят, энтеротоксемии овец (пораженных) и болезни почек овец, а также других энтеротоксемических заболеваний ягнят и телят. Большое количество токсина в дополнение к большому количеству клеток C.perfringens обычно можно обнаружить в кишечной жидкости больных или павших животных. Поскольку C. perfringens является естественным комменсалом кишечника человека и животных, идентификации бактерии недостаточно. Токсинотипирование и количественная оценка выделенных штаммов имеют важное значение.
Набор Bio-X multiscreen ELISA для альфа-токсина — Clostridium perfringens может обнаруживать альфа-токсин Clostridium perfringens и выявлять размножение бактерии.
Набор работает с культуральной жидкостью, а также с биологическими пробами, такими как жидкое содержимое кишечника и перикардиальная или перитонеальная жидкость.

ПРИНЦИП ИСПЫТАНИЯ

Ряды А и Е сенсибилизированы специфическими поликлональными антителами, продуцируемыми против α- токсина Clostridium perfringens, а ряды С и G моноклональными антителами, специфичными к структурному белку этой бактерии. Эти антитела позволяют специфически улавливать токсин или бактерии, которые могут присутствовать в образцах (кишечная жидкость, культуральные жидкости, биологические жидкости и т. д.).
Ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфическую иммунологическую реакцию и неспецифическое связывание, чтобы исключить ложноположительные результаты.
Все образцы, кроме культуральных супернатантов, разводят в буфере для разведения и инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при 21°С +/- 3°С.
После этой первой стадии инкубации планшет промывают, затем в лунки добавляют конъюгаты (меченый пероксидазой моноклональный анти-α-токсин или моноклональный анти-C. perfringens). Затем планшет повторно инкубируют в течение 1 часа при 21°C +/- 3°C. После этой второй стадии инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин ТМБ). Преимущество этого хромогена в том, что он более чувствителен, чем другие хромогены пероксидазы, и не является канцерогенным.
Если в тестируемых образцах присутствуют α-токсины и/или C. perfringens, конъюгаты остаются связанными с соответствующими микролунками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность полученного синего цвета пропорциональна содержанию токсина или патогенного агента в образце. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением, а результирующую оптическую плотность при 450 нм можно считать с помощью фотометра. Сигналы, считанные для микролунок отрицательного контроля, вычитаются из соответствующих микролунок положительного контроля.
Контрольный антиген предоставляется вместе с набором для подтверждения результатов теста.