ИФА для обнаружения антигена и серотипа вируса ящура (FMDV O, A, Asia1, C, SAT1, SAT2)

Метод основан на ИФА сэндвич типа, который проводят с выбранными комбинациями моноклональных антител (MAb) против ящура, используемых в виде конъюгированных антител. Тест может применяться для выявления и типирования вирусов ящура в гомогенатах везикул эпителия и в везикулярной жидкости. Только в таких образцах вирус ящура обычно концентрируется в количестве, досточном для обеспечения положительного сигнала в тестах ИФА. Набор предназначен для выявления и типирования вирусов ящура типов О, А, С, Asia1, SAT1 и SAT2. Тест может выявлять любые изоляты типов O, A, C и Asia 1. Также некоторые серотипы SAT включены в набор для дополнительного специфического типирования и выявления вирусов ящура, которые могут избежать связывания с выбранным типом специфических MAb. Микропланшеты предварительно покрыты улавливающими MAb, а положительные инактивированные контроли уже нанесены на лунки. Тестовые образцы (эпителиальные суспензии или везикулярные жидкости) инкубируют с MAb в лунках планшета. Вирус ящура, который присутствует в образцах, захватывается соответствующими типоспецифичными MAb и пан-ящурными MAb (это улавливающие антитела). После промывки для удаления несвязавшегося материала в соответствующие лунки распределяют два детекторных конъюгата: MAb pan-FMDV (для выявления серотипов O, A, C и Asial) и пул MAb pan-SATs (для выявления серотипов SAT), конъюгированные с пероксидазой (HRPO). В случае положительных образцов конъюгированные MAb связываются с вирусом ящура, захваченным захватывающим Ab, образуя комплекс Ag-Ab. После инкубации несвязавшийся конъюгат удаляют промывкой и в лунки вносят раствор ТМБ-хромоген. Колориметрическая реакция развивается, если конъюгат связался с антигеном образца: насыщенность окраски пропорционально количеству вирусного антигена, присутствующего в исследуемом образце. После добавления стоп-раствора оптическую плотность проявленного цвета считывают с помощью фотометра для микропланшетов. План планшета с деталями выбранных комбинаций, улавливающих и конъюгированных MAb показан на рисунке 1. Состав набора - Микропланшеты для ИФА, предварительно покрытые MAb и с положительными инактивированными/отрицательными контролями, запечатанные, готовые к использованию; - Конъюгат А: пан-ящурные моноклональные антитела типов O, A, C и Asial, конъюгированные с HRPO, концентрированные; - Конъюгат B: пул моноклональных антител SAT 1 и SAT2, конъюгированных с HRPO, концентрированный; - Буфер для разведения ИФА, готов к использованию; - PBS-Tween (промывочный раствор), концентрат 10Х; - Раствор субстрата/хромогена (TMB), готов к использованию; - Стоп-раствор (H2SO4 0,6N), готов к использованию.