ИФА для определения антител, специфичных к вирусу Ящура (FMDV), серотип SAT2

Животные, инфицированные или вакцинированные вирусами ящура (FMDV), вырабатывают антитела против белков вирусных капсидов, также называемых структурными белками (SP). Для обнаружения каждого из семи серотипов ящура должны использоваться разные тесты, также могут потребоваться специфические анализы даже для антигенно отдаленных вариантов внутри серотипа. Для серологической диагностики заболевания, чтобы обнаружить антитела против SP, используются ИФА и тест на нейтрализацию вируса. Работа с системами клеточных культур и инфекционными вирусами ящура в лабораториях с высокой степенью защиты достаточно сложная и занимает много времени, поэтому не подходит для крупномасштабного скрининга. Таким образом, для таких целей лучше всего использовать ИФА, т.к. он проще, быстрее, все реагенты набора готовы к использованию, подходит для крупномасштабного и автоматизированного анализа; кроме того, он может использовать инактивированные антигены ящура и, следовательно, может быть проведен в любой лаборатории. Контроль вируса ящура методом SP-серологии включает: - Серологические обследования во время вспышек/эпидемий (в сочетании с другими диагностическими тестами) - Стратегия выхода к эпидемии ящура (для восстановления статуса свободы от ящура) - Оценка охвата вакцинацией (кампании вакцинации) и вакциноиндуцированного иммунитета - Серологический мониторинг в странах с риском интродукции ящура (например, буферные зоны) - Импорт/экспорт, перемещение/торговля животными (включая экзотические виды, цирк, зоопарк и т.д.) Кроме того, в качестве косвенной оценки эффективности вакцин (вместо контрольного заражения) может быть указан уровень антител к SP. Применение и принцип анализа Анализ представляет собой твердофазный конкурентный ИФА (ТФХЭ) с использованием нейтрализующих моноклональных антител (MAb) против вируса ящура, специфичных к серотипу SAT2, для измерения антител против этого серотипа. Тест можно использовать для обнаружения антител в образцах сыворотки или плазмы инфицированных или вакцинированных ящуром животных любых восприимчивых видов. Инактивированный антиген вируса ящура захватывается специфическими MAb серотипа SAT2, покрытыми твердой фазой, с функцией улавливающего антитела. Микропланшеты для ИФА предварительно покрыты инактивированным антигеном вируса ящура типа SAT2, захваченным гомологичным моноклональным антителом. Соответствующим образом разбавленные тестовые сыворотки инкубируют с захваченным инактивированным антигеном, что позволяет специфическим антителам, в конечном счете присутствующим в образце, связываться с соответствующим антигеном. Затем вводят анти-FMDV MAb типа SAT2, конъюгированные с пероксидазой: его реакция с гомологичным антигеном будет ингибироваться антителами положительных сывороток, ранее связанных с вирусом, а в случае отрицательных сывороток конъюгированные MAb могут связываться с вирусом, чтобы инактивировать антиген вируса ящура. После инкубации несвязавшийся конъюгат удаляют промыванием и в лунки вносят субстрат ТМВ/хромоген. Колориметрическая реакция развивается, если конъюгированные MAb связались с вирусом, т. е. если тест-сыворотка отрицательна. Развитие окраски ингибируется положительными сыворотками. Концентрации инактивированного антигена и конъюгата предварительно откалиброваны для получения подходящего значения оптической плотности (ОП) реакции. После добавления стоп-раствора оптическую плотность проявленного цвета считывают с помощью фотометра для микропланшетов. Состав набора - Запечатанные микропланшеты, сенсибилизированные инактивированным вирусом ящура типа SAT2 (захваченным специфическим моноклональным антителом) - Конъюгированные с пероксидазой моноклональные антитела, нейтрализующие вирус ящура типа SAT2, конъюгированные с положительной контрольной сывороткой серотипа SAT2 вируса ящура - Отрицательный контроль вируса ящура - PBS-Tween, 10-кратный концентрат - Буфер для разведения (для сыворотки и конъюгата) - Раствор субстрата/хромогена (TMB) - Стоп-раствор (H2SO4 0,6N)